Veraltest professional

Как это работает

HBA-тест основан на принципах естественного отбора сперматозоидов при оплодотворении. Женские гаметы окружены и тесно связаны с так называемым кумулюсом — группой клеток, которые участвуют в нормальных процессах ее созревания и оплодотворения. Одним из важнейших компонентов кумулюса является гиалуронан, который удерживает клетки кумулюса вместе, образует сложную лабиринтную систему и играет решающую роль в селекции сперматозоидов. Последние могут преодолеть барьер на пути к яйцеклетке только предварительно связавшись с гиалуронаном. Для этого на последних этапах сперматогенеза они приобретают специальные рецепторы SPAM1. У недозрелых гамет таких рецепторов нет, поэтому они не могут проникнуть через кумулюс и оплодотворить яйцеклетку.

Для проведения теста небольшой образец эякулята помещают на предметное стекло с гиалуроновой кислотой. Спустя 5-10 минут эмбриолог с помощью микроскопа оценивает результат. Зрелые сперматозоиды связываются с гиалуронатом и теряют прогрессивную подвижность. Благодаря этому можно подсчитать процент связанных с гиалуроновой кислотой, а значит зрелых, половых клеток.

Показания к исследованию

• • Подготовка к ВРТ: ЭКО, ИКСИ, внутриматочная инсеминация.
• • Идиопатическое бесплодие.
• • Как метод, который позволяет косвенно судить о фрагментации ДНК в сперматозоидах.
• • Отсутствие эмбрионов хорошего качества в предыдущих попытках ЭКО.
• • Возраст мужчины свыше 35 лет.
• • Выбор оптимального метода ВРТ.

Исследование не проводится при отсутствии или недостаточном количестве подвижных сперматозоидов, в том числе при азооспермии, некрозооспермии, криптозооспермии.

HBA-тест не является рутинным скрининговым методом исследования и можетбыть рекомендован с учетом показателей общей спермограммы. Установлено, что низкий процент зрелых сперматозоидов косвенно связан с такими показателями, как концентрация, подвижность и морфология гамет. Нарушения этих показателей могут стать причиной назначения HBA-теста.

Маршрутизация и диагностика

После нашей первой публикации на проблемы диагностики обратили внимание врачи, и созданный ими «Клинический комитет» рекомендовал изменить маршрутизацию больных с клиническими признаками COVID-19 и вести их всех независимо от результатов молекулярной диагностики на коронавирус. Московский оперативный штаб согласился с этим предложением

Затем то же самое предписал
в пятой версии временных рекомендаций по COVID-19 Минздрав РФ. Аргументацию врачей объяснил главный врач больницы в Коммунарке Денис Проценко: «Кроме того, точность существующих тестов для выявления COVID-19 составляет 70–80%, а в некоторых случаях тестирование дает ложноотрицательные результаты и доля таких результатов значительна». По сути речь пошла об отказе диагностировать инфекцию по прямому анализу. Аргументы верны, но лишь для наиболее используемого в России теста ГНЦ «Вектор», недостаткам которого мы посвятили предыдущий материал. В целом же, молекулярная диагностика — отличный и на сегодня единственный инструмент, позволяющий напрямую выявить возбудителя в образце. Просто нужны точные и чувствительные наборы.

Сейчас, как и месяц назад, лаборатории центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора работают с той же тест-системой «Вектора» (используется также и «Вектор-OneStep ПЦР-CoV-RG» для контроля результатов первичного теста). Все положительные результаты анализов, сделанных как этим набором, так и системами других производителей (о них речь ниже), проверяют в центрах Роспотребнадзора. Нам не удалось достоверно выяснить, только ли эти системы используют для диагноза. Однако по меньшей мере один источник сообщил нам, что в московском ЦНИИ Эпидемиологии в этих целях делают анализ собственным тестом, характеристики которого значительно выше «векторовских». Вместе с тем система перепроверки создала огромную нагрузку на институт, в результате чего время на постановку диагноза остается неприлично большим — несколько дней.

Точность разных ПЦР-тест-систем

После попадания образцов в лабораторию правильность диагноза будет зависеть во многом от тест-системы, которую там используют. На сегодняшний день помимо двух тест-систем, разработанных еще в январе в ГНЦВБ «Вектор», зарегистрировано 8 ПЦР-тест систем []:

• АмплиТест SARS-CoV-2; разработан ФГБУ «Центр стратегического планирования» (ЦСП) Минздрава РФ, Москва;
• АмплиСенс CoVs-Bat-FL (ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва);
• Поливир SARS-CoV-2 (ООО «НПФ «Литех», Москва совместно с ФМБА и НИЦЭМ им. Гамалеи);
• РеалБест РНК SARS-CoV-2 (АО «Вектор-Бест», Новосибирск, Кольцово);
• набор реагентов для выявления РНК коронавирусов SARS-CoV-2 и подобных SARS-CoV (ООО «ДНК-Технология-ТС», Москва);
• набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 (ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России);
• SBT-DX-SARS-CoV-2 (ООО «Система-БиоТех»);
• набор ООО «МедипалТех» из Дубны (производителем указано ООО «Амплитек»).

Из них системы «Вектора» и «Вектор-Беста» (последняя через сеть лабораторий «Инвитро» []) используются для исследования проб от государственных медицинских организаций. Здесь хочется отметить, что система «Вектора» не содержит в своем составе внутреннего контрольного образца, который должен добавляться во все пробы для контроля правильности выделения РНК и реакции обратной транскрипции []. Отсутствие такого контроля может также потенциально приводить к некоторому количеству ложноотрицательных результатов. Хорошая новость заключается в том, что остальные зарегистрированные тест-системы имеют в своем составе внутренний контроль, а также, по-видимому, обладают более высокой чувствительностью, т.е. дают меньше ложноотрицательных результатов.

Что касается частных клиник, то компании «Хеликс» [] и «Гемотест» [] заявляют, что они используют систему ГНЦВБ «Вектор», в то время как CMD и «Ситилаб » используют более современные системы ЦНИИ Эпидемиологии и ДНК-технологии, соответственно [,

Таким образом, в городах, где представлены сетевые лаборатории, есть возможность сдать анализ частным образом и надеяться на точность проведения процедуры. В первые дни появления симптоматики точность будет выше.

Материалы и методы

Ретроспективное исследование проводилось в Федеральном дистанционном консультативном центре анестезиологии и реаниматологии для взрослых, созданном по приказу Минздрава РФ (No171 от 16.03.2020) на базе Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовского университета). Основная цель работы центра – организация дистанционных консультаций больных с SARS-CoV-2 инфекцией, потребовавших респираторной поддержки в условиях ОРИТ. Консультативная помощь оказывается круглосуточно без выходных дней ведущими сотрудниками Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, в том числе пульмонологами, реаниматологами, инфекционистами и терапевтами. При необходимости привлекаются врачи других специальностей – кардиологи, нефрологи, гепатологи и ревматологи. В соответствии с решением Минздрава РФ лечебные учреждения РФ должны направлять заявки на консультацию всех больных с COVID-19, госпитализированных в ОРИТ, на основании которых сотрудники центра дают рекомендации по дальнейшей тактике ведения, включая противовирусную и антибактериальную терапию, респираторную поддержку и т.п. В заявке на консультацию указываются название лечебного учреждения, демографические данные пациента, анамнез, сопутствующие заболевания, результаты лабораторных и инструментальных исследований, тип и длительность респираторной поддержки, проводимое лечение.

В ретроспективное исследование включали всех пациентов, проконсультированных до 30 апреля 2020 г. Диагноз SARS-CoV-2 инфекции устанавливали на основании выделения РНК вируса методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) со слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Если результаты вирусологического исследования на момент консультации были отрицательными, сомнительными или отсутствовали, то критериями диагноза служили клинические признаки острой респираторной инфекции, осложнившейся острой дыхательной недостаточностью (снижение SpО 2 <92% и необходимость в респираторной поддержке), в сочетании с характерными данными компьютерной томографии органов грудной клетки (двусторонние уплотнения легочнои ткани по типу «матового стекла», ретикулярные изменения на фоне «матового стекла», периферические участки консолидации и перилобулярные уплотнения) при отсутствии других возможных этиологических факторов (рис. 1). Степень выраженности изменений определяли с учетом распространенности и характера поражения паренхимы легких: КТ-0 (отсутствие признаков вирусной пневмонии); КТ-1 (зоны уплотнения по типу «матового стекла» ≤25% паренхимы легких); КТ-2 (зоны уплотнения по типу «матового стекла» с поражением 25-50% паренхимы легких); КТ-3 (зоны уплотнения по типу «матового стекла» и консолидации с поражением 50-75% паренхимы легких); КТ-4 (зоны уплотнения по типу «матового стекла» и консолидации в сочетании с ретикулярными изменениями с поражением ≥75% паренхимы легких).

Рис. 1. Типичные изменения на КТ органов грудной клетки
при SARS-CoV-2 пневмонии

На основании диагнозов, указанных в заявках на консультацию, анализировали следующие сопутствующие заболевания: артериальная гипертония, ишемическая болезнь сердца (ИБС), инсульт, фибрилляция предсердий, ожирение, сахарный диабет, бронхиальная астма, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), ревматические аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит, системная красная волчанка и т.п.), злокачественные опухоли, гемобластозы, ВИЧ-инфекция. Чтобы избежать гипердиагностики, ИБС фиксировали только при указании в анамнезе на пересенные острый инфаркт миокарда, стентирование коронарных артерий и/или аорто-коронарное шунтирование. Злокачественные опухоли учитывали, если они были выявлены в течение последних 5 лет. Если в заявке были указаны рост и масса тела пациента, то рассчитывали индекс массы тела, чтобы подтвердить наличие ожирения. Хроническую сердечную недостаточность, указанную в диагнозе, не учитывали в связи с трудностями интерпретации симптомов нарушения кровообращения на фоне острой дыхательной недостаточности и, соответственно, высокой вероятностью гипердиагностики этого состояния.

ИФА (иммуноферментный анализ)

ПЦР-тест-системы, как и КТ-диагностика выявляет COVID-19 в острой фазе. Однако весьма актуальна и информация об уже переболевших, на основании которой можно судить об охвате населения заболеванием, а также о числе бессимптомных случаев. Ответы на эти, а также на многие другие вопросы, может дать тест-система на антитела. На сегодняшний день разработкой таких тест-систем помимо «Вектора» занимаются такие организации как «Вектор-Бест», «НПО «Диагностические системы», ФНКЦ ФХМ ФМБА России, «МБС-Технологии», а также «Генетико» и Институт молекулярной биологии РАН . К сожалению, тест-системы на антитела требуют намного больших усилий и времени на разработку, чем ПЦР-системы, а их чувствительность и специфичность оставляет желать лучшего. Так, проведенное в США исследование доступных система на антитела показало, что лишь 3 из 14 систем дают надежные результаты (т.е. не более 1% ложноположительных результатов), но при этом их чувствительность не превышает 90% относительно положительных контрольных образцов []. Какова будет чувствительность и специфичность разрабатываемых российских систем – пока неизвестно.

Итак, самое разумное, что вы можете сказать клиентам:

Если у вас первые пять дней симптомов – вполне можно сдать пробы для ПЦР-диагностики в частных центрах, в идеале, заказав выезд специалистов на дом

Желательно тестироваться в тех лабораториях, которые используют системы с контрольными образцами, о чем мы писали выше. 

Если тест дал отрицательный результат или прошло больше пяти дней от начала болезни, а симптомы сохраняются, то в этом случае можно сделать КТ, при этом соблюдать все меры предосторожности, ведь в очереди запросто могут оказаться люди с новой коронавирусной инфекцией. 

Проводить ИФА при текущей низкой точности – едва ли имеет смысл. 
Если у вас нет симптомов, но был контакт, то можно пройти ПЦР-диагностику, но лучше всего на 14 дней уйти на самоизоляцию и наблюдать за самочувствием.. Регистрируйся на нашем сайте и получай доступ ко всем материалам о COVID-19 в специальном разделе

Регистрируйся на нашем сайте и получай доступ ко всем материалам о COVID-19 в специальном разделе.

Самое важное по теме: антисептик оптики для рук, гигиена рук, дезинфекция в аптеке, правила использования масок, мифы и факты о коронавирусе, фармконсултирование по жаропонижающим и гипотензивным во время пандемии. 

Отвечаем на вопросы в прямых эфирах Вконтакте: https://vk.com/pharmznanie 

Обсудить последние новости со всеми коллегами России вы можете в чатах:

Экспресс-тесты

Кроме ОТ-ПЦР-тестов, в РФ зарегистрированы два теста, которые используют изотермическую амплификацию. Разница в том, что ПЦР требует температурного цикла — быстрого чередования трех температур реакционной среды — и проводится в специальном приборе — термоциклере. Изотермическая реакция идет при постоянной температуре, поэтому ее можно провести быстрее. У нее есть и другие преимущества, которые делают ее удобной для экспресс-тестирования. В идеале такой тест проводится прямо там, где берут образец — у постели больного в клинике, в аэропорту и приемном покое больницы. Но для этого, помимо «химии», нужен мобильный прибор.

Экспресс-тест «Изотерм SARS-CoV-2 РНК-скрин» на основе петлевой изотермической амплификации (LAMP) разработан в компании «МБС-Технология», на массовый рынок ее выводит АО «Генериум» (подробнее
на PCR.news). В Москве и области его также предлагает клиентам компания LabQuest, в дополнение к ПЦР-тестам. Basis Genomic Group, дочерняя компания «МБС-Технологии», поставляет его клиникам, лабораториям и корпоративным клиентам в Новосибирске.

Как сообщают разработчики, чувствительность теста — те же 103 копий вирусного генома в миллилитре, специфичность превышает 99%. Руководитель лаборатории Basis Genomic Group Вячеслав Романов
рассказывает, что у них выделение РНК занимает 15 минут, а 20–25 минут — амплификация и детекция по методике ОТ-LAMP.

Еще до начала пандемии лаборатория «МБС-Технологии», находящаяся в Технопарке новосибирского Академгородка, начала разработку быстрых тестов для диагностики острых кишечных инфекций, вызванных антибиотикорезистентными штаммами, и других опасных заболеваний. Планировали создать тесты на чипах и прибор для диагностики у постели больного, однако в экстренной ситуации для выявления нового коронавируса ту же «химию» сделали на планшетах.

Лаборатория «МБС-технологии» небольшая, ее профиль — LDT, laboratory developed tests (тесты, которые можно использовать внутри лаборатории, но не разрешено коммерциализировать). О крупномасштабном производстве и реализации заключили соглашение с «Генериумом».

«В систему Роспотребнадзора мы пришли чуть позже, чем остальные тест-системы, и поэтому сейчас она тестируется, сравнивается с другими. Но в ближайшее время они появятся и там, говорит Романов. — А в лабораториях третьей-четвертой группы, которым разрешили делать эти тесты, уже практически по всей стране применяется наши тест-системы. В Новосибирске, в Красноярске, в Казани, в Москве».

В первых числах апреля Роспотребнадзор начал составление реестра лабораторий, которые хотят проводить тестирование на SARS-CoV-2. «МБС-технология» тоже подала заявку и получила разрешение. «Меньше чем за два часа циклопроизводства мы можем выдать тысячу исследований. Мы заявили в Роспотребнадзор 500 исследований. Думали, что поскромничали, оказалось, что мы дали большие объемы», — рассказывает Романов.

Другой экспресс-тест казанской ООО «Эвотек Мирай Геномикс» использует технологию амплификации SmartAmp, разработанную институтом RIKEN в Иокогаме и японской компанией Dnaform. Права на применение этой технологии переданы российской компании. Разработка приборной части — портативной мини-лаборатории, которая позволяет не отправлять образцы в стационарную лабораторию, а проводить исследование на месте — проводилась при поддержке Российского фонда прямых инвестиций. Поставка этих приборов в Москву уже начата. Директор ООО ЭМГ Ленар Валеев говорит, что итоговая отгрузка мини-лабораторий в апреле должна составить 1000 штук.

Сообщается также, что тест-систему на микрофлюидных чипах для индивидуального тестирования на SARS-CoV-2 разработал Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины (ФНКЦ ФХМ) ФМБА России.

Между клиникой и лабораторией

Потенциальным клиентам очень нравится идея тестов на дому: человек заказывает тест, сам у себя берет мазок, помещает тампон в пробирку, герметично упаковывает и отправляет анализ с курьером, не нарушая самоизоляции. Тем не менее многие специалисты относятся к такому варианту скептически. Нет гарантии, что человек самостоятельно возьмет мазок правильно, даже под наблюдением специалиста.

То, что происходит с образцом до выделения РНК и амплификации, не менее важно, чем качество тест-системы. «70% всех лабораторных ошибок — это преаналитика: неправильное взятие, неправильное хранение, неправильная транспортировка», — говорит Станислав Гольдберг, генеральный директор ООО «ГЕМ»

Его дочерняя компания, ООО «Полигем», производит еще один продукт первой необходимости — транспортные системы для образцов. Транспортная система — это блистерная упаковка, в которой находится зонд-тампон и герметично закрытая пробирка со средой. Эти системы у компании заказывают Департамент здравоохранения Москвы, региональные минздравы, затем их распределяют по медицинским учреждениям.

В таком формате, с раствором в пробирке, а не в виде сухих реагентов, транспортные среды выпускает в России только эта компания. Также у нас есть импорт из Китая; Европа сейчас закрыла поставки из-за собственного дефицита.

«На сегодняшний день мы можем делать примерно 250 тысяч в месяц, то есть около 10 тысяч в день, — говорит Станислав Гольдберг. — По самым скромным подсчетам, нужно раза в три-четыре больше. Но у нас есть договоренность с Минпромторгом, и мы, наверное, через три месяца в пять-шесть раз увеличим объем производства».

К идее самостоятельного взятия мазков Гольдберг относится отрицательно: «Представьте себе, назальный мазок нужно взять из нижней части носоглотки, засунуть себе на шесть сантиметров зонд в нос. Мало кто сможет правильно сделать. И с миндалин тоже правильно взять сложно».

Почему-то параллельно с мазками из носоглотки и ротоглотки не берут образцы кала для анализа на SARS-CoV-2. Можно спорить, насколько опасен и жизнеспособен вирус в ЖКТ, фекально-оральный путь заражения, кажется, до сих пор не показан, однако РНК вируса в фекалиях содержится
в достаточном количестве. Возможно, такое дополнение к алгоритму обследования «подозрительных» пациентов снизило бы неопределенность во многих случаях.

КТ

Преимущество КТ-диагностики при наличии клинической картины – это  скорость постановки диагноза и более высокая чувствительность по сравнению с реальностью ПЦР-диагностики: 97,2 % против 83,3 % согласно данным небольшого китайского исследования []. Начиная с 4-5 дня заболевания можно различить так называемый симптом «матового стекла», на стадии прогрессирования такие участки консолидируются,  возникает симптом «булыжной мостовой», «обратного ореола», а в пиковая стадии – «белое легкое» []. Возникает закономерный вопрос: отличается ли картина пневмонии, вызванной именно новым коронавирусом, от заболеваний другой вирусной природы. Ответ – нет. Вирусные пневмонии, будь то аденовирус, грипп или другие респираторные вирусы, выглядят на КТ одинаково.

Однако в условиях пандемии, когда подавляющее большинство вирусных пневмоний имеют коронавирусную природу, использование КТ для диагностики становится более чем оправданным. В последней версии методических рекомендаций Минздрава по профилактике, диагностике и лечению COVID-19 указано, что «наличие клинических проявлений в сочетании с характерными изменениями в легких по данным КТ или обзорной рентгенографии органов грудной клетки вне зависимости от результатов однократного лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2 и эпидемиологического анамнеза» является клинически подтвержденным случаем COVID-19 []. Отметим также, что объем поражения легких при РГ и КТ может не иметь прямой корреляции с клинической тяжестью заболевания. 

СУТЬ ПЦР ТЕСТА

Полимеразная цепная реакция или ПЦР – это метод амплификации определенного фрагмента интересующего участка ДНК. Для получения истинного результата предполагается, что нуклеотидная последовательность исследуемой ДНК ИЗВЕСТНА. На основе последовательностей синтезируются короткие одноцепочечные фрагменты ДНК или праймеры на основе принципа комплементарности. Во время амплификации исследуемый участок ДНК расщепляется на две одиночные нити, и обе нити синтезируются обратно в двойные нити на основе связанных с ними праймеров. В результате из одного сегмента ДНК получаются две идентичные нити ДНК. Циклы повторяются, и количество исследуемых участков ДНК увеличивается в геометрической прогрессии. Следовательно, ПЦР может дать миллионы и миллиарды копий небольшого количества образцов ДНК за короткий период времени.

Благодаря быстродействию, простоте использования и чувствительности этот метод получил широкое распространение в различных областях, в том числе при обнаружении инфекционных заболеваний. В случае РНК-вирусов, таких как коронавирус, к методу добавляется дополнительный этап синтеза – обратная транскриптаза, где, согласно принципу комплементарности, вирусная РНК сначала получается из ДНК, которая затем амплифицируется с помощью ПЦР. Результат часто отслеживается в режиме реального времени, и это изменение в ПЦР-анализе называется rRT-PCR (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени или (real time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction).

Однако ни один метод не является безупречным и требует дополнительной проверки и калибровки. Праймеры для ПЦР специфичны для участков, и можно утверждать, что праймеры, разработанные для участка X, не могут размножать участок Y. Затем, при разработке каждого конкретного протокола ПЦР, существует несколько химико-физических и других параметров, которые определяют результат анализа. Случайные мутации во время тестирования, возможность перекрестного заражения , человеческого фактора и т. д. также играют важную роль.

Комбинации результатов тестов на коронавирус разными методами

Может говорить об острой фазе инфекции COVID-19; не дает информации о наличие или отсутствие у пациента коронавируса; не дает информации, является ли он потенциальным распространителем вируса или нет. 

Требуется проведение теста методом ПЦР.

Рекомендована самоизоляция на 2 недели.

Может говорить о поздней фазе инфекции.

Требуется повторить анализ через 2-4 недели.

Может говорить об острой фазе инфекции COVID-19 с выделением вируса и возможностью стать источником потенциального заражения.

Требуется консультация врача и самоизоляция на 2 недели.

Свидетельствует о факте контакта с вирусом в прошлом с формированием специфического иммунного ответа. Вероятность повторного заражения существенно снижена (наличие устойчивого иммунитета к коронавирусу пока не доказано). Вероятность выделения вируса минимальная. Дополнительные обследования при отсутствие симптомов не требуются.  

Рекомендовано продолжать соблюдение социального дистанцирования и мер предосторожности, так как на сегодняшний день не накоплено достаточно данных, позволяющих полностью исключить возможность повторного заражения. 

Свидетельствует о факте контакта с вирусом в прошлом с формированием специфического иммунного ответа. Вероятность повторного заражения существенно снижена (наличие устойчивого иммунитета к коронавирусу пока не доказано). Вероятность выделения вируса минимальная. Дополнительные обследования при отсутствие симптомов не требуются.  

Рекомендовано продолжать соблюдение социального дистанцирования и мер предосторожности, так как на сегодняшний день не накоплено достаточно данных, позволяющих полностью исключить возможность повторного заражения. 

Нет данных о контакте этого человека с коронавирусом. При наличие симптомов рекомендовано дополнительно сдать анализ методом ПЦР, а также повторить анализ на IgM и IgG антитела через 2-4 недели

В ЕС-Клинике вы можете пройти ПЦР-диагностику, экспресс-тестирование за 15 минут методом ИХА или сдать кровь на анализ на антитела методом ИФА. Мы проводим все виды тестирования на коронавирус и антитела IgG, IgM к SARS-COV-2 (COVID-19) для физических и юридических лиц. Берем анализ в клинике или с выездом на дом, в офис, на предприятие. Заявки принимаем круглосуточно по телефону +7(499)4500303